Prime Editing点突变细胞构建实验流程及应用常见问答
常见问答
Q：KI修复模板选择和设计？
A：在PE里面是不存在KI模版的，只需要将我们想改变的碱基序列设计在peg的3’端就可以了。
Q:抗性浓度摸索和细胞倍增时间怎么优化？
A：因为细胞扩增时间越长，对抗生素就越敏感。我们一般会设定筛选的时间大约在细胞扩增两次的时间。
Q：PE点突变细胞构建实验一般用多少载体？
A：一般用3-4个载体，一个载体表达PE蛋白，一个载体表达pegRNA，MLHDN和nicksgRNA这两个载体按实验需求使用。
Q：载体的比例是怎样的？
A：一般是PE载体用量大一些，其次是pegRNA，然后是MLHDN和nicksgRNA，因为PE载体比较大，也是实验的主要元件，所以用量会多一些。具体比例根据细胞而异。
Q：一般会设计几个PE？
A：根据位点情况一般设计2-3组，然后根据RBS长度，PBS长度，RTT长度去选择最优的PE。
Q：多克隆测序分析工具有哪些？
A：①Synthego ICE Analysis Tool ②TIDE
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