【直播回顾】CRISPR文库筛选x单细胞测序的结合应用

3月26日15:00，艾迪基因有幸邀请了10x genomics应用科学家权争辉博士开展了主题为[关于CRISPR文库筛选x单细胞测序]线上课程，为大家详细介绍了CRISPR文库筛选与单细胞测序的应用场景，以及实验中的技术要点。课程中分享了一些应用案例，如利用单细胞CRISPR筛选确定抑制急性髓性白血病(AML)分化的基因，或是确定人体细胞感染 SARS-CoV-2 所需的宿主因子等，充分展示了CRISPR文库筛选和单细胞测序技术结合的潜力。

案例讲解

1、利用单细胞CRISPR筛选确定抑制急性髓性白血病(AML)分化的基因以及调控分化的分子

2、利用单细胞CRISPR筛选确定人体细胞感染 SARS-CoV-2 所需的宿主因子

*文末直播回放含更多案例讲解

精彩问答

Q：48小时一定要更换细胞培养基吗？可否仅在细胞传代的同时更换新培养基呢？

A：在更换培养基不影响细胞生长的情况下，我们建议48小时更换，这样抗性浓度会更稳定。

 

Q：文库转染后没有加荧光的话，怎么验证其表达量？

A：单细胞测序和经典文库筛选是稍有不同的，做单细胞测序时使用的sgRNA不会特别多，我们可以使用一个带荧光标签的sgRNA进行文库构建。

如果构建完文库没有带标签的，我们可以做靶细胞杀伤抗性，在一定程度上可以提高表达量。

 
Q：怎么确认单个细胞只转染了单个sgRNA，是只能全基因组测序后才知道吗？

A：这个与MOI有关，只要前期把MOI摸索好，达到最佳的感染复数才能确保每个细胞最多进入一个慢病毒。

以上是本次直播课部分问答，更多精彩内容可移步观看直播回放视频，点击查看>>

CRISPR技术直播课指路：

CRISPR文库筛选第一课：CRISPR文库筛选实验流程及应用

CRISPR文库筛选第二课：CRISPR激活文库实验流程及应用

PE先导编辑第一课：Prime Editing点突变细胞构建流程