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野生型细胞

SN4741(小鼠多巴胺能神经细胞)

¥1600

SN4741细胞经过严格质检,确保代次低、活性高、无污染,适用于各种细胞实验。

  • 货 号: EDWT0207
  • 规 格: 1×10⁶cells
  • 形 态: 贴壁

产品名称

SN4741(小鼠多巴胺能神经细胞)

货号

EDWT0207

规格

1×10⁶cells

保存条件

液氮保存

细胞形态

贴壁

细胞培养基

DMEM + 10% FBS+1%PS

冻存培养基

完全培养基+30%FBS+5%DMSO

细胞复苏方法

注意:收到的细胞如 24h 内复苏,可存放于-80℃冰箱;超过 24h 请存放于液氮中,复苏前 10min 取出,放于-80℃,让管中液氮挥发。
1.水浴锅 37℃预热;
2.适合该细胞系的完全培养基温浴到 37℃;
3.在 15mL 离心管中加入 6mL 完全培养基备用;
4.从-80℃冰箱中取出细胞,在 37℃水浴中轻轻转动冻存管,直到冻存管内仅剩余一小块冰芯,使细胞在 1min 内迅速解冻(水不能没过盖子或用封口膜把冻存管口封上);
5.将冻存管转移到超净工作台内;打开盖子前,用 75%酒精擦拭冻存管外部;
6.用移液枪吸取细胞冻存悬液,转移至已预热的完全培养基的离心管内;
7.用 1mL 完全培养基洗涤冻存管 1 次,收集残留细胞,减少损失;
8. 细胞悬液以 1100rpm 离心 4min(离心速度和时间取决于细胞种类)
9.离心后,检查上清液是否清澈,有无完整的细胞沉淀;在无菌条件下,小心倒掉上清液,加入 1mL 完全培养基,轻柔吹打细胞沉淀,充分吹散、混匀;
10.将细胞平均接种到 1 个 T25 培养瓶或底面积相当的培养容器中。加入足量完全培养基,1 个 T25 培养瓶中培养基总量不少于 6mL(实际培养瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数量);
11.摇匀细胞,放入 37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中(培养环境取决于细胞和培养基类型);
12.复苏次日,观察细胞状态。
(1)贴壁细胞若细胞贴壁情况良好,可以更换新鲜的完全培养基;若观察到细胞呈圆亮形态但不贴壁,可以让细胞继续培养 24h 后再进行换液操作。之后,根据细胞的生长状况,每2-3 天更换一次完全培养基,观察细胞,生长至 80%以上的汇合度,即需传代。若细胞生长较慢或汇合度较低时,可以减少换液次数。
(2)悬浮细胞复苏后尽量放在相对小一些的容器中,使用含 20%血清的培养基复苏。悬浮细胞若细胞状态良好,可以更换新鲜的完全培养基;若细胞状态差且呈现灰度,可以继续培养 72h 后再观察细胞。观察发现有活细胞,可进行换液操作,观察细胞无明显变化,及时反馈本公司售后。

细胞传代方法

1.将完全培养基、PBS、胰酶预热至 37℃;
2.从培养容器中吸弃上清;
3.从容器一侧轻轻加入冲洗液 PBS(T25 培养瓶加入约 6mL)洗涤细胞 1 次。注意动作轻柔,清洗全面,避免搅动细胞层,前后摇晃容器数次吸去 PBS(注:冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁);
4.加入胰酶(T25 培养瓶加入约 3mL),迅速铺匀,保证充分接触细胞表面。放入培养箱消化;
5.显微镜下观察消化情况,约 70%~80%细胞收缩变圆后,轻拍培养容器外壁,使细胞脱离培养表面;
6.立即加入 2 倍胰酶体积的完全培养基(T25 培养瓶加入约 6mL),随即轻摇培养容器,使培养基和胰酶迅速混匀,终止消化;
7.使用移液管吸取细胞悬液,吹打培养容器底面数次,尽可能将细胞都吹打下来;注意:吹打动作不可剧烈,避免产生大量气泡,损伤和损失细胞。
8.将细胞悬液转移至离心管中。用 PBS(T25 培养瓶加入约 3mL)洗涤容器 1 次,收集残留细胞;
9.收集的所有细胞悬液以 1100rpm 离心 4min;
10.离心后去除上清。加入 1mL 完全培养基,轻柔吹打细胞沉淀,充分吹散、混匀;
11.将细胞按一定的比例传代接种,建议首次按照 1:3 进行传代,若细胞在两天内长满可增加传代比例,若细胞生长三四天还未长满,可适当缩小传代比例;
注意:请根据细胞实际生长情况调整传代比例。
12.摇匀细胞,放入 37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中(如果使用培养瓶,将其放入培养箱前应将瓶盖旋松,以便进行充分的气体交换,除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖);
13.传代次日,观察细胞状态。若发现较多死细胞,进行换液操作。之后,每根据细胞的生长情况更换完全培养基,观察细胞,生长至 80%以上的汇合度,即需传代或冻存。

传代比例

1/3,2days