相比于Cas13a和Cas12a,AapCas12b的最佳反应温度为60℃,更耐高温,因此适合与环介导等温扩增(LAMP)联用,在现场快速核酸检测领域具有广泛的应用前景。
AapCas12b Nuclease说明书
【产品名称】AapCas12b Nuclease 【分子量】130.5KDa
【产品编号】EDE0006 【形式】液体
【产品简介】
AapCas12b核酸酶(又名C2c1)源自酸性脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus acidophilus,是一种依赖 crRNA介导的核酸内切酶,在靶标双链DNA存在PAM(TTN)序列的情况下,由crRNA介导特异性识别并切割双链DNA,而AapCas12b特异性切割靶标单链DNA则不依赖PAM序列。AapCas12b-crRNA复合物与互补单链DNA或者双链DNA结合后,其非特异性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的最佳反应温度为60℃,相比于Cas13a和Cas12a,更耐高温,因此适合与环介导等温扩增(LAMP)联用,在现场快速核酸检测领域具有广泛的应用前景。
【产品组分】
组分 |
EDE0006-100 |
EDE0006-500 |
EDE0006-1000 |
AapCas12b Nuclease |
5 μM*20 μL (100 pmol) |
5 μM*100 μL (500 pmol) |
5 μM*200 μL (1000 pmol) |
AapCas12b Cleavage Buffer(10×) |
80 μL*1管 |
400 μL*1管 |
800 μL*1管 |
【储存条件及有效期】
有效期1年,保存条件-20°C;如长期储存,建议置于-80°C。
建议根据使用次数进行分装,避免反复冻融。
【产品特点】
采用一步法纯化制备,最大程度保留酶活性,经过测试酶活性显著高于同类产品。
【活性定义】
在总体积为20 μL的反应体系中,60℃反应条件下,1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12b酶量定义为1 transU。
例:若某批次AapCas12b酶的反式切割活性为 30 transU/pmol,则表明1 pmol的该批次AapCas12b酶可在1 min内,在上述指定的反应条件下,反式切割30 pmol的ssDNA探针。
【质量保证】
样品纯度:~95% (SDS-PAGE鉴定)。
【检测步骤】
需要准备的其它试剂
1. Reporter:Cas12b切割底物,即在剪切反应体系中加入ssDNA报告探针,该探针5′端标记荧光报告基团(FAM),3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的 Reporter进行检测,或自行设计合成Reporter。
产品名称 |
编号 |
ssDNA reporter(DNA探针) |
EDD0001 |
2. crRNA/gRNA:与 Cas12b 结合,形成功能复合物,被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。
名称 |
规格 |
编号 |
crRNA生物合成 |
2OD |
EDR0002 |
crRNA化学合成 |
2OD |
EDR0003 |
免费设计咨询:info@edgene.cn
3. 恒温扩增反应试剂盒。
【测试反应体系】
组分 |
终浓度 |
体积(μL) |
10× Cleavage Buffer |
1× |
2 μL |
5 μM AapCas12b Nuclease |
150-250 nM |
0.8 μL(200 nM) |
500 nM crRNA |
150-250 nM |
8 μL(200 nM) |
4 μM ssDNA Reporter |
150-250 nM |
1 μL(200 nM) |
1 μM DNA target |
150-250 nM |
4 μL(200 nM) |
DEPC H2O |
|
|
Total |
20 μL |
20 μL |
【反应条件】
使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号,60℃反应,每 30 sec采集一次荧光信号。也可在紫外灯下直接观察荧光信号。
拍照示例
【注意事项】
1. 为防止 RNase 污染,请保持实验区干净整洁,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
2. Cas12酶容易失活,在使用后立即将酶置于-20℃保存。