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LbCas12a属于2类V型CRISPR效应蛋白，是一种依赖crRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（TTN）序列的情况下，由crRNA介导特异性识别并切割双链DNA.
LbCas12a Nuclease说明书
【产品名称】LbCas12a Nuclease 【分子量】146.8 KDa
【产品编号】EDE0005 【形式】液体
【产品简介】
LbCas12a（又名Cpf）核酸酶来源于Lachnospiraceae bacterium ND2006 菌株。LbCas12a属于2类V型CRISPR效应蛋白，是一种依赖crRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（TTN）序列的情况下，由crRNA介导特异性识别并切割双链DNA，而LbCas12a 特异性切割靶标单链DNA不依赖PAM序列。同时，LbCas12a-crRNA复合物与互补单链DNA或者双链DNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活，通过设计两端标记荧光基团或其它小分子标记的单链Reporter DNA，可实现Cas12a对DNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪和试纸条观察结果。
【产品组分】
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组分 |
EDE0005-100 |
EDE0005-1000 |
EDE0005-2000 |
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LbCas12a Nuclease |
1 μM*100 μL（100 pmol） |
1 μM*500 μL*2管（1000 pmol） |
1 μM* 500 μL*4管（2000 pmol） |
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LbCas12a Cleavage Buffer（10×） |
500 μL*1管 |
1mL*4管 |
1mL*7管 |
【储存条件及有效期】
有效期1年，保存条件-20°C；如长期储存，建议置于-80°C。
建议根据使用次数进行分装，避免反复冻融。
【产品特点】
采用一步法纯化制备，最大程度保留酶活性，经过酶活性测试显著高于同类产品。
【活性定义】
在总体积为30 μL的反应体系中，37°C反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12a酶量定义为1 transU。
例：若某批次LbCas12a酶的反式切割活性为30 transU/pmol，则表明1 pmol 的该批次 LbCas12a 酶可在1 min内，在上述指定的反应条件下，反式切割30 pmol的ssDNA探针。
【质量保证】
样品纯度：～95% （SDS-PAGE鉴定）。
【检测步骤】
需要准备的其它试剂
1. Reporter：Cas12a切割底物。即在剪切反应体系中加入ssDNA报告探针，该探针5′端标记荧光报告基团(FAM)，3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的Reporter进行检测，或自行设计合成 Reporter。
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产品名称 |
编号 |
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ssDNA reporter（DNA探针） |
EDD0001 |
2. crRNA/gRNA：与 Cas12a 结合，形成功能复合物，被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。
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名称 |
规格 |
编号 |
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crRNA生物合成 |
2OD |
EDR0002 |
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crRNA化学合成 |
2OD |
EDR0003 |
免费设计咨询：info@edgene.cn
3. 恒温扩增反应试剂盒，RPA扩增试剂盒。
【测试反应体系】
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组分 |
体积/ μL |
终浓度 |
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10×Cleavage Buffer |
3 |
1× |
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1 μM LbCas12a Nuclease |
1 |
33 nM |
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500 nM crRNA |
2 |
33 nM |
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2 μM ssDNA Reporter |
6 |
400 nM |
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1 μM DNA target |
0.1 |
3.5 nM |
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DEPC H2O |
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Total |
30 μL |
30 μL |
【反应条件】
使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
【实验结果】
Fig 1. Results of Cas12a collateral cleavage at different company product.
横坐标为反应时间，纵坐标为 Bio-rad CFX96荧光PCR仪检测结果。由图可见，相同的条件下，可见本品切割效率显著高于同类产品。
拍照示例
【注意事项】
1. 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为RNase-free。
2. Cas12a 酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20℃保存。
