18102225074(同微信) market@edgene.cn
Cas12a

LbCas12a

¥2280

LbCas12a属于2类V型CRISPR效应蛋白,是一种依赖crRNA介导的核酸内切酶,在靶标双链DNA存在PAM(TTN)序列的情况下,由crRNA介导特异性识别并切割双链DNA.

  • 货 号: EDE0005-2000
  • 规 格: 2000pmol
  • 形 态: 液体

LbCas12a Nuclease说明书

【产品名称】LbCas12a Nuclease         【分子量】146.8 KDa

【产品编号】EDE0005                        【形式】液体

【产品简介】

LbCas12a(又名Cpf)核酸酶来源于Lachnospiraceae bacterium ND2006 菌株。LbCas12a属于2类V型CRISPR效应蛋白,是一种依赖crRNA介导的核酸内切酶,在靶标双链DNA存在PAM(TTN)序列的情况下,由crRNA介导特异性识别并切割双链DNA,而LbCas12a 特异性切割靶标单链DNA不依赖PAM序列。同时,LbCas12a-crRNA复合物与互补单链DNA或者双链DNA结合后,其非特异性ssDNA反式切割活性被激活,通过设计两端标记荧光基团或其它小分子标记的单链Reporter DNA,可实现Cas12a对DNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪和试纸条观察结果。

【产品组分】

组分

EDE0005-100

EDE0005-1000

EDE0005-2000

LbCas12a Nuclease

1 μM*100 μL(100 pmol

1 μM*500 μL*2管(1000 pmol

1 μM* 500 μL*4管(2000 pmol

LbCas12a Cleavage Buffer(10×)

500 μL*1管

1mL*4管

1mL*7管

 【储存条件及有效期】

有效期1年,保存条件-20°C;如长期储存,建议置于-80°C。

建议根据使用次数进行分装,避免反复冻融。

【产品特点】

采用一步法纯化制备,最大程度保留酶活性,经过酶活性测试显著高于同类产品。

【活性定义】

在总体积为30 μL的反应体系中,37°C反应条件下,1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12a酶量定义为1 transU。

例:若某批次LbCas12a酶的反式切割活性为30 transU/pmol,则表明1 pmol 的该批次 LbCas12a 酶可在1 min内,在上述指定的反应条件下,反式切割30 pmol的ssDNA探针。

【质量保证】

样品纯度:~95% (SDS-PAGE鉴定)。

【检测步骤】

需要准备的其它试剂

1. Reporter:Cas12a切割底物。即在剪切反应体系中加入ssDNA报告探针,该探针5′端标记荧光报告基团(FAM),3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的Reporter进行检测,或自行设计合成 Reporter。

产品名称

编号

ssDNA reporter(DNA探针)

EDD0001

2. crRNA/gRNA:与 Cas12a 结合,形成功能复合物,被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。

 名称

规格

编号

crRNA生物合成

2OD

EDR0002

crRNA化学合成

2OD

EDR0003

免费设计咨询:info@edgene.cn

3. 恒温扩增反应试剂盒,RPA扩增试剂盒。

【测试反应体系】

组分

积/ μL

终浓度

10×Cleavage Buffer

3

1 μM LbCas12a Nuclease

1

33 nM

500 nM crRNA

2

33 nM

2 μM ssDNA Reporter

6

400 nM

1 μM DNA target

0.1

3.5 nM

DEPC H2O

 

 

Total

30 μL

30 μL

 

【反应条件】

使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号,37℃反应,每30 sec采集一次荧光信号。

【实验结果】

Fig 1. Results of Cas12a collateral cleavage at different company product.

横坐标为反应时间,纵坐标为 Bio-rad CFX96荧光PCR仪检测结果。由图可见,相同的条件下,可见本品切割效率显著高于同类产品。

拍照示例

 

 

【注意事项】

1. 为防止RNase污染,请保持实验区干净整洁,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用枪头、离心管等耗材均为RNase-free。

2. Cas12a 酶对热敏感,容易失活,应全程冰上配置反应体系,并在使用后立即将酶置于-20℃保存。

 


相关推荐