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LwaCas13a属于Ⅱ类Ⅵ型 CRISPR系统效应蛋白，是由crRNA介导的核酸内切酶，在识别并切割靶标RNA时，其“附属切割”活性被激活，可非特异切割体系中单链 RNA(ssRNA)。
LwaCas13a Nuclease说明书
【产品名称】LwaCas13a Nuclease 【分子量】140.1KDa
【产品编号】EDE0001 【形式】液体
【产品简介】
LwaCas13a（又名C2c2）来源于Leptotrichia wadei菌株。LwaCas13a属于Ⅱ类Ⅵ型 CRISPR系统效应蛋白，是由crRNA介导的核酸内切酶，在识别并切割靶标RNA时，其“附属切割”活性被激活，可非特异切割体系中单链 RNA(ssRNA)。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪或试纸观察结果。
【产品组分】
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组分 |
EDE0001-100 |
EDE0001-500 |
EDE0001-1000 |
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LwaCas13a Nuclease |
5 μM*20 μL（100 pmol） |
5 μM*100 μL （500 pmol） |
5 μM*200 μL （1000 pmol） |
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LwaCas13a Cleavage Buffer（5×） |
500 μL*1管 |
500 μL*4管 |
1mL*4管 |
【储存条件及有效期】
有效期1年，保存条件-20°C；如长期储存，建议置于-80°C。
建议根据使用次数进行分装，避免反复冻融。
【产品特点】
采用一步法纯化制备，最大程度保留酶活性，经过测试酶活性显著高于同类产品。
【活性定义】
在总体积为20 μL的反应体系中，37℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量定义为1 transU。
例：若某批次LwaCas13a酶的反式切割活性为9 transU/pmol，则表明1 pmol的该批次 LwaCas13a酶可在1 min内，在上述指定的反应条件下，反式切割9 pmol ssRNA探针。
【质量保证】
样品纯度：～95% （SDS-PAGE鉴定）。
【检测步骤】
需要准备的其它试剂
1. Reporter：Cas13a 切割底物。即在剪切反应体系中加入ssRNA报告探针，该探针5′端标记荧光报告基团(FAM)，3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的Reporter 进行检测，或自行设计合成 Reporter。
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产品名称 |
编号 |
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ssRNA reporter（RNA探针） |
EDR0001 |
2. crRNA/gRNA：与 Cas13a 结合，形成功能复合物，被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。
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名称 |
规格 |
编号 |
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crRNA生物合成 |
2OD |
EDR0002 |
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crRNA化学合成 |
2OD |
EDR0003 |
免费设计咨询：info@edgene.cn
3. RNase Inhibitor （可选）：抑制 RNase，防止RNA降解。（货号：AI101-02）
4. 恒温扩增试剂盒，RPA扩增试剂盒。
【测试反应体系】
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组分 |
体积/ μL |
终浓度 |
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5 μM LwaCas13a |
0.2 |
50 nM |
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5×Cleavage Buffer |
4 |
1X |
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500 nM crRNA |
1 |
25 nM |
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2 μM ssRNA Reporter |
1.25 |
125 nM |
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10 U RNase Inhibitor |
1 |
0.5 U |
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1 μM RNA target |
1 |
50 nM |
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H2O |
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Total |
20 μL |
20 μL |
【反应条件】
使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号，37℃反应，每 30 sec 采集一次荧光信号。
【酶活性对比实验结果】
Fig 1. Results of Cas13 collateral cleavage at different product.
横坐标为反应时间，纵坐标为 Bio-rad CFX96荧光PCR仪检测结果。由图可见，相同的条件下，本产品在20分钟内可完全切割RNA报告探针，并达到荧光峰值，而其他同类产品荧光值明显较低，反应速度较慢，可见本品切割效率显著高于同类产品。
【注意事项】
1. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
2. Cas13a 酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20℃保存。
