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Cas13a

LwaCas13a

¥2680

LwaCas13a属于Ⅱ类Ⅵ型 CRISPR系统效应蛋白,是由crRNA介导的核酸内切酶,在识别并切割靶标RNA时,其“附属切割”活性被激活,可非特异切割体系中单链 RNA(ssRNA)。

  • 货 号: EDE0001-500
  • 规 格: 500pmol
  • 形 态: 液体

LwaCas13a Nuclease说明书

【产品名称】LwaCas13a Nuclease           【分子量】140.1KDa

【产品编号】EDE0001                            【形式】液体

【产品简介】 

LwaCas13a(又名C2c2)来源于Leptotrichia wadei菌株。LwaCas13a属于Ⅱ类Ⅵ型 CRISPR系统效应蛋白,是由crRNA介导的核酸内切酶,在识别并切割靶标RNA时,其“附属切割”活性被激活,可非特异切割体系中单链 RNA(ssRNA)。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针,可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪或试纸观察结果。

【产品组分】

组分

EDE0001-100

EDE0001-500

EDE0001-1000

LwaCas13a Nuclease

5 μM*20 μL(100 pmol)

5 μM*100 μL

(500 pmol)

5 μM*200 μL

(1000 pmol)

LwaCas13a Cleavage Buffer(5×

500 μL*1管

500 μL*4

1mL*4


 

【储存条件及有效期】

有效期1年,保存条件-20°C;如长期储存,建议置于-80°C。

建议根据使用次数进行分装,避免反复冻融。

【产品特点】

采用一步法纯化制备,最大程度保留酶活性,经过测试酶活性显著高于同类产品。

【活性定义】

在总体积为20 μL的反应体系中,37℃反应条件下,1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量定义为1 transU。

例:若某批次LwaCas13a酶的反式切割活性为9 transU/pmol,则表明1 pmol的该批次 LwaCas13a酶可在1 min内,在上述指定的反应条件下,反式切割9 pmol ssRNA探针。

【质量保证】

样品纯度:~95% (SDS-PAGE鉴定)。

 

 

【检测步骤】

需要准备的其它试剂

1. Reporter:Cas13a 切割底物。即在剪切反应体系中加入ssRNA报告探针,该探针5′端标记荧光报告基团(FAM),3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的Reporter 进行检测,或自行设计合成 Reporter。

产品名称

编号

ssRNA reporter(RNA探针)

EDR0001

2. crRNA/gRNA:与 Cas13a 结合,形成功能复合物,被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。

名称

规格

编号

crRNA生物合成

2OD

EDR0002

crRNA化学合成

2OD

EDR0003

免费设计咨询:info@edgene.cn

3. RNase Inhibitor (可选):抑制 RNase,防止RNA降解。(货号:AI101-02)

4. 恒温扩增试剂盒,RPA扩增试剂盒。

 

【测试反应体系】

组分

积/ μL

终浓度

μM LwaCas13a

0.2

50 nM

5×Cleavage Buffer

4

1X

500 nM crRNA

1

25 nM

2 μM ssRNA Reporter

1.25

125 nM

10 U RNase Inhibitor

1

0.5 U

1 μM RNA target

1

50 nM

H2O

 

 

Total

20 μL

20 μL

【反应条件】

使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号,37℃反应,每 30 sec 采集一次荧光信号。

【酶活性对比实验结果】

 

Fig 1. Results of Cas13 collateral cleavage at different product.

横坐标为反应时间,纵坐标为 Bio-rad CFX96荧光PCR仪检测结果。由图可见,相同的条件下,本产品在20分钟内可完全切割RNA报告探针,并达到荧光峰值,而其他同类产品荧光值明显较低,反应速度较慢,可见本品切割效率显著高于同类产品。

 

【注意事项】

1. 为防止 RNase 污染,请保持实验区干净整洁,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. Cas13a 酶对热敏感,容易失活,应全程冰上配置反应体系,并在使用后立即将酶置于-20℃保存。

 


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