Bingo™先导编辑点突变平台

艾迪基因全新研发Bingo™先导编辑基因定点突变平台，可提供精准、高效的在细胞中进行基因点突变。Bingo™平台是基于目前最高效、最安全的先导编辑PE (Prime Editing) 基因定点突变技术，艾迪基因凝聚十多年基因编辑经验，在上千例基因编辑CRO项目经验中总结、优化、提升，成功率远超传统基因定点突变系统。

先导编辑技术原理

先导基因编辑 (Prime editing, PE) 是一种更高效、更精确的 CRISPR基因定点突变工具。与传统的CRISPR/Cas9基因编辑技术不同，先导编辑使用了一种新的Cas9酶——Cas9 nickase (Cas9n)，它不会把DNA完全切断，只会剪切双链DNA中的一条链，这样细胞在修复DNA时，就不会发生引入随机突变的修复了。

先导基因编辑（PE)就是一个查找-替换的过程。设计一个两端分别携带gRNA 和基因编辑后模板序列的 pegRNA (prime editing guide RNA ,pegRNA)，pegRNA含有特异的引物序列（类似sgRNA）和先导编辑蛋白，特异的引物序列可以定位到特异的位点，先导编辑蛋白是cas9 nickase（切DNA单链）和逆转录酶（RT）的融合蛋白。pegRNA的引物序列引导Cas9 nicknase切割DNA单链，逆转录酶依照未配对pegRNA序列合成新的DNA序列，原位合成新的编辑后序列替代原有序列的过程。

PE系统的组成包括先导编辑蛋白（Cas9 nickase、逆转录酶）和 pegRNA。Cas9 nickase是Cas9 H840A nickase，可以切割DNA单链；逆转录酶（reverse transcripase，RT）是M-MLV；融合后的蛋白可以提高基因编辑效率，被称作为PE1。通过引入逆转录酶RT的突变，提高模板链和引物结合位点的结合能力，进而提高没得活力和稳定性，可以讲PE的编辑效率提高2.3-5.1倍，这被称为PE2。

pegRNA一段包含逆转录模板的向导RNA和基因组序列互补的部分作为引物结合位点（Prime binding site, PBS），引物结合位点PBS和目标序列结合的位置作为逆转录的起始位点。

借助Cas9n、逆转录酶和特殊设计的gRNA(prime editing guide RNA ,pegRNA)，先导编辑技术可以实现4种转换突变（C→T, G→A, A→G, T→C），和8种颠换突变（C→A, C→G, G→C, G→T, A→C, A→T, T→A, T→G），真正实现了精确性和泛用性共存的基因编辑。除了单个碱基的突变外，先导编辑还可以引入多至44bp的插入和多至80bp的敲除。欢迎联系我们的技术专家定制您的专属基因定点突变方案

服务流程

1. 设计一段带有转录模板（携带想要的基因信息）和必要Prime Binding Site（PBS）的 PE 编辑专用 gRNA——pegRNA。

2. Cas9切口酶在pegRNA上的sgRNA序列指引下，切割DNA单链，pegRNA 3′-端的PBS（引物结合序列）可以与切割断点前的互补序列识别配对

3. 逆转录酶（M-MLV RT）以pegRNA上PBS序列后的人工设计的模板序列为模板进行逆转录，将目标序列直接聚合到切口的DNA链上

4. 编辑后的DNA 双链延伸出一段额外新合成的 DNA Flap，启动细胞自有的3‘flap-5’flap equilibration 机制，将 DNA 原有的片段切除。

5.不匹配的DNA 双链通过错配修复（mismatch repair，MMR）机制，把非编辑链修复，整个编辑过程就完成了。

相关业务

●  基因定点突变细胞定制：独家专利优化PE系统，可实现阳性率>85%，比传统CRISPR/Cas9点突变更安全，不脱靶，更精准。

●  基因突变细胞系现货：全新推出的点突变癌症模型细胞现货库，覆盖目前最常见的癌症相关基因的定点突变，助力癌症基础研究和癌症诊断、治疗的研发。