AapCas12b Nuclease说明书

【产品名称】AapCas12b Nuclease         【分子量】130.5KDa

【产品编号】EDE0006                           【形式】液体

【产品简介】

AapCas12b核酸酶（又名C2c1）源自酸性脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus acidophilus，是一种依赖 crRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（TTN）序列的情况下，由crRNA介导特异性识别并切割双链DNA，而AapCas12b特异性切割靶标单链DNA则不依赖PAM序列。AapCas12b-crRNA复合物与互补单链DNA或者双链DNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的最佳反应温度为60℃，相比于Cas13a和Cas12a，更耐高温，因此适合与环介导等温扩增（LAMP）联用，在现场快速核酸检测领域具有广泛的应用前景。

【产品组分】

组分	EDE0006-100	EDE0006-500	EDE0006-1000
AapCas12b Nuclease	5 μM*20 μL （100 pmol）	5 μM*100 μL （500 pmol）	5 μM*200 μL （1000 pmol）
AapCas12b Cleavage Buffer（10×）	80 μL*1管	400 μL*1管	800 μL*1管

 

【储存条件及有效期】

有效期1年，保存条件-20°C；如长期储存，建议置于-80°C。

建议根据使用次数进行分装，避免反复冻融。

【产品特点】

采用一步法纯化制备，最大程度保留酶活性，经过测试酶活性显著高于同类产品。

【活性定义】

在总体积为20 μL的反应体系中，60℃反应条件下，1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12b酶量定义为1 transU。

例：若某批次AapCas12b酶的反式切割活性为 30 transU/pmol，则表明1 pmol的该批次AapCas12b酶可在1 min内，在上述指定的反应条件下，反式切割30 pmol的ssDNA探针。

【质量保证】

样品纯度：～95% （SDS-PAGE鉴定）。

 

【检测步骤】

需要准备的其它试剂

1. Reporter：Cas12b切割底物，即在剪切反应体系中加入ssDNA报告探针，该探针5′端标记荧光报告基团(FAM)，3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的 Reporter进行检测，或自行设计合成Reporter。

2. crRNA/gRNA：与 Cas12b 结合，形成功能复合物，被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。

免费设计咨询：info@edgene.cn

3. 恒温扩增反应试剂盒。

 

【测试反应体系】

组分	终浓度	体积（μL）
10× Cleavage Buffer	1×	2 μL
5 μM AapCas12b Nuclease	150-250 nM	0.8 μL（200 nM）
500 nM crRNA	150-250 nM	8 μL（200 nM）
4 μM ssDNA Reporter	150-250 nM	1 μL（200 nM）
1 μM DNA target	150-250 nM	4 μL（200 nM）
DEPC H2O
Total	20 μL	20 μL

 

【反应条件】

使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号，60℃反应，每 30 sec采集一次荧光信号。也可在紫外灯下直接观察荧光信号。

拍照示例

 

 【注意事项】

1. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. Cas12酶容易失活，在使用后立即将酶置于-20℃保存。