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Cas12a

AapCas12b

¥4980

相比于Cas13a和Cas12a,AapCas12b的最佳反应温度为60℃,更耐高温,因此适合与环介导等温扩增(LAMP)联用,在现场快速核酸检测领域具有广泛的应用前景。

  • 货 号: EDE0006-1000
  • 规 格: 1000pmol
  • 形 态: 液体

AapCas12b Nuclease说明书

【产品名称】AapCas12b Nuclease         【分子量】130.5KDa

【产品编号】EDE0006                           【形式】液体

【产品简介】

AapCas12b核酸酶(又名C2c1)源自酸性脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus acidophilus,是一种依赖 crRNA介导的核酸内切酶,在靶标双链DNA存在PAM(TTN)序列的情况下,由crRNA介导特异性识别并切割双链DNA,而AapCas12b特异性切割靶标单链DNA则不依赖PAM序列。AapCas12b-crRNA复合物与互补单链DNA或者双链DNA结合后,其非特异性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的最佳反应温度为60℃,相比于Cas13a和Cas12a,更耐高温,因此适合与环介导等温扩增(LAMP)联用,在现场快速核酸检测领域具有广泛的应用前景。

【产品组分】

组分

EDE0006-100

EDE0006-500

EDE0006-1000

AapCas12b Nuclease

5 μM*20 μL

(100 pmol)

5 μM*100 μL

(500 pmol)

5 μM*200 μL

(1000 pmol)

AapCas12b Cleavage Buffer(10×)

80 μL*1管

400 μL*1

800 μL*1

 

【储存条件及有效期】

有效期1年,保存条件-20°C;如长期储存,建议置于-80°C。

建议根据使用次数进行分装,避免反复冻融。

【产品特点】

采用一步法纯化制备,最大程度保留酶活性,经过测试酶活性显著高于同类产品。

【活性定义】

在总体积为20 μL的反应体系中,60℃反应条件下,1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12b酶量定义为1 transU。

例:若某批次AapCas12b酶的反式切割活性为 30 transU/pmol,则表明1 pmol的该批次AapCas12b酶可在1 min内,在上述指定的反应条件下,反式切割30 pmol的ssDNA探针。

【质量保证】

样品纯度:~95% (SDS-PAGE鉴定)。

 

【检测步骤】

需要准备的其它试剂

1. Reporter:Cas12b切割底物,即在剪切反应体系中加入ssDNA报告探针,该探针5′端标记荧光报告基团(FAM),3′端标记荧光淬灭基团(BHQ1)。可搭配我司的 Reporter进行检测,或自行设计合成Reporter。

产品名称

编号

ssDNA reporter(DNA探针)

EDD0001

2. crRNA/gRNA:与 Cas12b 结合,形成功能复合物,被目标序列特异性激活。可选择我司的crRNA或自行设计合成crRNA。

 名称

规格

编号

crRNA生物合成

2OD

EDR0002

crRNA化学合成

2OD

EDR0003

免费设计咨询:info@edgene.cn

3. 恒温扩增反应试剂盒。

 

【测试反应体系】

组分

终浓度

体积(μL)

10× Cleavage Buffer

2 μL

μM AapCas12b Nuclease

150-250 nM

0.8 μL200 nM

500 nM crRNA

150-250 nM

8 μL200 nM

μM ssDNA Reporter

150-250 nM

1 μL200 nM

μM DNA target

150-250 nM

4 μL200 nM

DEPC H2O

 

 

Total

20 μL

20 μL

 

【反应条件】

使用实时荧光定量PCR仪或恒温扩增仪检测荧光信号,60℃反应,每 30 sec采集一次荧光信号。也可在紫外灯下直接观察荧光信号。

拍照示例

 

 【注意事项】

1. 为防止 RNase 污染,请保持实验区干净整洁,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. Cas12酶容易失活,在使用后立即将酶置于-20℃保存。


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