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CRISPR检测服务
服务详情
| 交付标准 | 靶标质粒、crRNA、RPA恒温扩增引物、结题报告、50个反应的试剂CRISPR配套试剂盒 |
|---|---|
| 应用领域 | 1.疾病检测2.食品安全3.动物疫病4.环境检测 |
| 周期/价格 |
 在线咨询 |
FASST快速检测平台
FASST（Fast, accurate, specific, and simple test）是⼀种基于CRISPR检测开发的下⼀代⾼灵敏度、⾼特异性、快速恒温的单管核酸检测技术。FASST依靠多种酶类在常温下协同作⽤，实现核酸的快速扩增和检测，具有双重特异性和双重信号放大优点，是真正的POCT技术。
传统CRISPR检测主要包括两管反应和单管反应两种形式。其中，两管反应操作复杂、易受污染；单管反应虽然简便且污染风险小，但灵敏度低、耗时。FASST技术基于艾迪基因自主开发的蛋白质纯化平台，通过优化升级Cas酶结构，采用独特的crRNA设计逻辑，生产高效crRNA以及reporter，形成单管反应检测，在降低污染风险的情况下，将检测限提高到amol级别，将检测时间缩短至十分钟，实现了灵敏特异、快速准确的核酸检测，解决了传统CRISPR检测的痛点。
原理图
技术优势
技术对比
| 项 目 | FASST | PCR | LAMP等恒温扩增 | 传统CRISPR检测 |
|---|---|---|---|---|
|
反应温度 |
37-42℃ 恒温 |
95℃-55℃-72℃ 变温 |
65℃ 恒温 |
37-42℃ 恒温 |
| 运行时间 | 5-20 mins | 1-2h | 40-60mins | 30-60 mins |
|
引物数量 |
2条 |
2条 |
4-6条 |
2条 |
| 试剂状态 | 液体/冻干 | 液体 | 液体 | 液体/冻干 |
| 设备要求 | 恒温设备(金属浴，水浴等) | PCR扩增仪 | 恒温设备 | 恒温设备(金属浴，水浴等） |
| 操作性 | 操作极为简单可实现 真正意义上的便携 | 专业操作要求,高设备操作复杂 | 操作简单 | 操作极为简单 可实现真正意义上的便携 |
| 气溶胶污染 | 单管反应，污染风险低 | 存在气溶胶污染风险 | 存在气溶胶污染风险 | 两管反应，存在气溶胶污染风险 |
艾迪基因可提供服务
艾迪基因基于CRISPR检测开发的高灵敏度、高特异性、快速恒温核酸检测技术——FASST快速检测技术，解决了传统CRISPR检测中存在的问题，如操作复杂、易污染、灵敏度低和耗时长。通过自主开发的蛋白质纯化平台优化Cas酶结构，开发特有的crRNA设计逻辑，生产高效crRNA，并使用自主设计的reporter，实现更高灵敏检测，简化操作步骤，减少污染风险。可根据您的实验需求选择：分步定制或全套定制检测服务。
服务内容与交付标准
| 服务内容 | 服务说明 | 交付标准 |
|---|---|---|
|
制备靶标基因模板 |
合成靶标质粒 | 靶标质粒 |
| crRNA和RPA恒温扩增引物的设计与合成 | 根据靶标序列设计crRNA和RPA引物 | crRNA，2 OD |
| RPA恒温扩增引物的活性筛选 | 多对RPA引物分别扩增靶标序列，确认效率最好的引物对 | RPA恒温扩增引物，2 OD |
| crRNA的活性筛选 | 多条crRNA进行活性分析，确认效率最好的crRNA | 结题报告与原始数据 |
| crRNA和RPA恒温扩增引物的实验体系建立和优化 | 对RPA引物对和crRNA的最佳组合进行灵敏度测试、特异性测试和准确性测试 | 结题报告与原始数据 |
| FASST检测整套服务 | / | 结题报告，50个反应的试剂CRISPR配套试剂盒 |
实验流程
应用案例
① 非洲猪瘟病毒检测
结果:使用ASFV 1070检测非洲猪瘟病毒，CRISPR/Cas12a一管法检测技术可在10min内检测到100 copies的核酸;可在20min内检测到10-50 copies的核酸。
② 鹦鹉博尔纳病毒检测
结果：CRISPR/Cas12a两管法检测技术(RPA反应30min，CRISPR检测10min)可在40min内检测到10 copies的鹦鹉博尔纳病毒核酸。
③ 流产布鲁杆菌检测
结果: CRISPR/Cas12a两管法检测技术(RPA反应30min，CRISPR检测10min)可在40min内检测到100 copies的流产布鲁杆菌核酸。
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
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FAQ
如何提高Cas酶的检测灵敏度？
1）设计高效的crRNA序列。通过合理的设计以及在线网站结构预测，选择合适的crRNA,以获得良好的Cas酶反式切割活性。
2）选择合适的信号报告底物。有关研究指出，使用15 nt的单链DNA（ssDNA）作为报告底物时，Cas12a的切割反应速率达到最大值，相较于常用的5-nt ssDNA，反应速率显著提升。
3）优化反应条件和缓冲液。通过优化CRISPR反应的条件如Cas酶与crRNA比例、Cas酶使用浓度、反应温度等可以在一定程度上提高检测效果。
2）选择合适的信号报告底物。有关研究指出，使用15 nt的单链DNA（ssDNA）作为报告底物时，Cas12a的切割反应速率达到最大值，相较于常用的5-nt ssDNA，反应速率显著提升。
3）优化反应条件和缓冲液。通过优化CRISPR反应的条件如Cas酶与crRNA比例、Cas酶使用浓度、反应温度等可以在一定程度上提高检测效果。
如何设计crRNA？
可根据以下步骤进行设计
1）明确目的基因序列。
2）明确使用的Cas蛋白。不同的Cas蛋白，需要识别相应的PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列，例如Cas12a需要依靠“TTTV”PAM序列进行靶标识别。
3）选择crRNA靶向区域。在目标基因上选择一个20nt核苷酸序列，该序列紧邻PAM位点，且与crRNA的互补链配对。
4）选定的20nt靶向区域作为 target sequence（可变部分）加上scaffold sequence （固定部分）以设计crRNA序列。
5）使用在线工具如CRISPR design tool（例如CRISPOR、 Benchling等）来帮助设计crRNA。这些工具可以预测sgRNA的效率和特异性，避免可能的脱靶效应。
6）设计完成后，可以通过合成生物学公司订购合成的crRNA序列。
1）明确目的基因序列。
2）明确使用的Cas蛋白。不同的Cas蛋白，需要识别相应的PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列，例如Cas12a需要依靠“TTTV”PAM序列进行靶标识别。
3）选择crRNA靶向区域。在目标基因上选择一个20nt核苷酸序列，该序列紧邻PAM位点，且与crRNA的互补链配对。
4）选定的20nt靶向区域作为 target sequence（可变部分）加上scaffold sequence （固定部分）以设计crRNA序列。
5）使用在线工具如CRISPR design tool（例如CRISPOR、 Benchling等）来帮助设计crRNA。这些工具可以预测sgRNA的效率和特异性，避免可能的脱靶效应。
6）设计完成后，可以通过合成生物学公司订购合成的crRNA序列。
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