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基因编辑用酶的定制开发
Cas核酸酶是CRISPR-Cas系统的核心组成部分，是一类RNA引导的核酸内切酶。Cas核酸酶利用向导RNA精确识别目标核酸，随后高效地切割目标核酸分子。在众多Cas酶中，Cas9、Cas12a和Cas13a等，因其卓越的性能，在基因编辑和体外诊断等多个领域已经得到了广泛的应用。
服务详情
| 应用领域 | 1、基因编辑 2、CRISPR检测 |
|---|---|
| 周期/价格 |
 在线咨询 |
艾迪基因积累了多年的Cas酶开发经验和搭建了成熟的蛋白表达纯化平台，可提供基因编辑用酶的定制服务。利用软件辅助设计和优化基因编辑用酶，并采用自主研发的Fish/Bait一步纯化技术，简化了蛋白纯化流程，显著提高了目标蛋白的回收率和纯度，确保了编辑用酶的高活性。
服务优势
多年基因编辑经验
根据客户需求定制基因编辑用酶
多年CRISPR检测经验
根据客户需求定制CRISPR检测用酶
交付灵活
多种类多规格可选
技术路线
已开发产品种类/类型
| Spcas9 | Lbcas12a | Aapcas12b | Lbucas13a | Lwacas13a | |
|---|---|---|---|---|---|
| PAM/PFS | 5’-NGG-3’ | 5’-TTTV-3’ | 5’-TTN-3’ | None | None |
| None | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Cis-cleavage | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Trans-cleavage | None | ssDNA | ssDNA | ssRNA | ssRNA |
SpCas9是一种依赖于sgRNA引导的 DNA内切核酸酶。在靶标DNA存在PAM（5’-NGG-3’）的情况下，SpCas9 Nuclease能在sgRNA引导下特异性结合并切割靶标dsDNA，使DNA双链断裂并生成平末端。其切割位点位于目标序列target sequence内，距离PAM 3个碱基的位置。SpCas9不仅可用于基因编辑，还可应用于体外靶标 DNA 的切割、目的片段的克隆等实验。
LbCas12a是一种依赖crRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（（5’-TTTV-3’）序列的情况下，LbCas12a能在crRNA介导下特异性识别并切割双链DNA，而LbCas12a 特异性切割靶标单链DNA不依赖PAM序列。LbCas12a-crRNA复合物与互补dsDNA或ssDNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活，通过设计两端标记荧光基团或其它小分子标记的Reporter ssDNA，可实现Cas12a对DNA模板的检测和信号放大，可通过荧光仪和试纸条观察结果。
AapCas12b核酸酶是一种依赖 sgRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（5’-TTN-3’）序列的情况下，由sgRNA介导特异性识别并切割双链DNA，而AapCas12b特异性切割靶标单链DNA则不依赖PAM序列。AapCas12b-crRNA复合物与互补的dsDNA或者ssDNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的最佳反应温度为60℃，因此适合与环介导等温扩增（LAMP）联用。
LbuCas13a是一种由crRNA介导的核酸内切酶，对PAM（PFS）位点无依赖性。在crRNA识别并切割靶标RNA时，Lbucas13a的反式切割活性被激活，可非特异切割体系中单链 RNA(ssRNA)。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现对RNA模板的检测和信号放大，可通过荧光仪或试纸条观察结果。
LwaCas13a是一种由crRNA介导的核酸内切酶，与LbuCas13a一样，对PAM（PFS）位点无依赖性。在crRNA识别并切割靶标RNA时，Lwacas13a的反式切割活性被激活，可实现对体系中的ssRNA的非特异切割。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪或试纸观察结果。
数据案例
通过活性测试，对比艾迪基因提供的基因编辑用酶与竞品的性能。
反应体系中添加待检Target模板、Cas酶、crRNA和荧光探针，当crRNA与Cas酶组装成功能复合物并识别Target模板后，会激活Cas酶的反式切割活性并切割荧光探针释放出荧光信号，通过荧光值来反映酶的性能。左图和右图是分别针对Lbucas12a和Lwacas3a两种酶进行测试，结果显示，艾迪基因提供的酶的荧光强度更强，切割活性与灵敏性明显更优。
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
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FAQ
一般CRISPR相关试剂以及Cas蛋白可以存放多久？
CRISPR检测相关试剂：
①RPA恒温扩增试剂盒于-20℃保存，可长期存放。
②靶标质粒可长期存放-20℃ ③ Cas蛋白反复冻融容易影响活性，建议分装多管，存放-80℃，根据实验需要取出使用。另外，短期内使用的，可放-20℃保存。
③crRNA容易降解，建议短时间内用不到的于-80℃保存。
④探针是DNA双链，相对来说没有那么容易降解，可放-20℃保存。
①RPA恒温扩增试剂盒于-20℃保存，可长期存放。
②靶标质粒可长期存放-20℃ ③ Cas蛋白反复冻融容易影响活性，建议分装多管，存放-80℃，根据实验需要取出使用。另外，短期内使用的，可放-20℃保存。
③crRNA容易降解，建议短时间内用不到的于-80℃保存。
④探针是DNA双链，相对来说没有那么容易降解，可放-20℃保存。
Cas9、Cas12和Cas13三者之间有什么区别？
Cas9、Cas12和Cas13三者的主要区别在于作用过程有差异：
Cas12与guide RNA、target DNA结合后会被激发针对ssDNA的反式剪切活性；Cas13与guide RNA、target RNA结合后会被激发针对ssRNA的反式剪切活性；而Cas9暂未被报道反式剪切活性。
Cas12与guide RNA、target DNA结合后会被激发针对ssDNA的反式剪切活性；Cas13与guide RNA、target RNA结合后会被激发针对ssRNA的反式剪切活性；而Cas9暂未被报道反式剪切活性。
dsDNA靶标和ssDNA靶标均能激活Cas12a的反式剪切活性吗？哪种效率更高？
双链DNA靶标和单链DNA靶标均能激活Cas12a的反式剪切活性(trans-cleavage，又名collateral cleavage)，这点与Cas12b相同。但不同的是，ssDNA靶标激发Cas12b反式活性的效率高于dsDNA靶标；而dsDNA靶标激发Cas12a反式活性的效率高于ssDNA靶标。
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