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基因敲除载体构建
艾迪基因基于自身研发的EditX™基因编辑平台，采用优化升级的CRISPR/Cas9系统，可综合研究目的、基因与细胞等情况，制定合适的敲除策略，构建符合需求的敲除载体。
服务详情
| 服务类型 | 敲除慢病毒载体/敲除腺病毒载体/敲除腺相关病毒载体/敲除瞬转载体 |
|---|---|
| 交付标准 | 1.质粒图谱2.质粒测序结果3.质粒扩增操作说明4.质粒（三条sgRNA分装） |
| 周期/价格 |
 在线咨询 |
目前常用CRISPR-Cas9系统来实现基因敲除，CRISPR-Cas9系统具由sgRNA和Cas9两部分组成。Cas9蛋白是一种由gRNA引导的DNA切割酶，具有特异切割双链DNA的活性。在gRNA的引导下，Cas9蛋白能够识别并结合到目标DNA序列上。一旦Cas9蛋白与目标DNA序列结合，其切割活性就被启动，导致DNA双链断裂（DSB），成为细胞修复机制的一个信号。细胞对于DNA双链断裂有两种主要的修复方式：非同源末端连接（NHEJ）和同源重组（HDR）。
*非同源末端连接（NHEJ）：在没有模板DNA的情况下，细胞通过NHEJ修复机制将断裂的DNA两端连接起来。但这一过程容易引入小的插入或缺失（Indels），导致基因失活。这种修复方式常被用于基因敲除。
*同源重组（HDR）：当提供一段模板DNA时，细胞可以通过HDR修复机制在修复过程中精确插入新的DNA序列。这种修复方式被用于引入特定的突变或基因片段。
敲除方案
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移码敲除
针对基因的编码区前端设计sgRNA，实现碱基非3的倍数的indel
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大片段敲除
针对基因设计sgRNA，实现长片段删除
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小片段敲除
针对基因设计sgRNA，实现短片段删除，并造成移码突变
服务优势
高活性的Cas9质粒
经过优化的高活性Cas9蛋白，使得基因敲除变得更加高效
高效的sgRNA设计
自主研发的高效sgRNA设计算法
多种敲除质粒类型
可构建不同类型的敲除载体，如瞬转敲除质粒、慢病毒敲除质粒、腺病毒敲除质粒、腺相关病毒敲除质粒等
科学设计
可根据靶细胞，优化相应的Cas9表达盒和sgRNA表达盒
交付标准
| 1 | 质粒图谱 |
|---|---|
| 2 | 质粒测序结果 |
| 3 | 质粒扩增操作说明 |
| 4 | 质粒（三条sgRNA分装） |
质粒图谱
lentiCRISPR慢病毒敲除质粒图谱
SpCas9瞬转敲除质粒图谱
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
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参考文献
MIA PaCa-2和PANC-1细胞中敲除FUT8基因
α1,6-Fucosyltransferase contributes to cell migration and proliferation as well as to cancer stemness features in pancreatic carcinoma
胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adencarcinoma, PDAC)是一种极其恶性的肿瘤，占所有胰腺癌的90%。研究表明，癌细胞表面的异常糖基化变化与肿瘤进展和转移正相关，α1,6-岩藻糖基转移酶（FUT8）是负责催化核心岩藻糖基化的关键酶，其在多种恶性肿瘤中的表达和激活异常，与多种生理和病理过程相关，尽管FUT8在其他类型的癌症中的作用已被观察到，但其在PDAC恶性转化中的具体分子机制和作为潜在治疗靶点的可能性尚不清楚。
研究人员使用CRISPR/Cas9系统在MIA PaCa-2和PANC-1细胞中敲除FUT8基因，通过Transwell迁移实验和创伤愈合实验评估FUT8-KO细胞的迁移能力，通过MTT实验和集落形成实验评估FUT8-KO细胞的增殖能力，并检测了FUT8-KO细胞中癌症干细胞标志物的表达水平。结果显示，与野生型细胞相比，FUT8-KO细胞的迁移能力、增殖和集落形成能力显著降低，FUT8-KO细胞中癌症干细胞标志物的表达降低。FUT8基因敲除细胞揭示了FUT8在胰腺癌中的重要作用，证明了FUT8可能是胰腺癌治疗的一个潜在靶点，为未来的胰腺癌治疗策略提供了新的视角。
FAQ
如何选择合适的载体类型？
选择载体时，应考虑实验的目的和宿主细胞的类型。例如，质粒载体常用于细菌中基因的表达或扩增，病毒载体则更适合用于哺乳动物细胞中的基因转导。除此之外，载体的启动子、复制子以及抗生素选择标记也需要根据具体需求进行选择。
艾迪基因载体构建的宿主菌是什么？顾客可以使用什么类型菌株来扩增质粒载体？
载体在进行扩增时，通常会使用大肠杆菌（E. coli）菌株来进行。在实验操作中，常用的大肠杆菌菌株是DH5α。DH5α适用于大多数非重组型载体。对于重组型载体，如慢病毒载体和转座子载体等，可以使用Stbl3菌株进行扩增。Stbl3是一种特殊的大肠杆菌（E. coli）菌株，来源于，HB101 E. coli strain，其基因组含有重组酶recA13突变，这可以有效地抑制长片段末端重复区的重组，从而降低错误重组的概率。
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