RNP递送
RNP递送(Ribonucleoprotein delivery),是指将Cas蛋白和sgRNA/crRNA组成的RNP复合体通过电转染或RNP转染试剂等方式递送到细胞核内,实现基因编辑。
RNP递送优点:
1. 递送效率高、细胞适用范围广:RNP递送可以有效地将Cas-sgRNA/crRNA复合体递送到多种类型的细胞中,包括难以转染的细胞,如免疫细胞和干细胞。
2. 细胞毒性和脱靶效应低:RNP的半衰期较短,完成基因编辑后快速从细胞中清除,对细胞的毒副作用低,此外也限制了脱靶效应的可能性。
3. 解决蛋白质表达困难:直接递送RNP可以避免某些罕见真核启动子导致的蛋白质表达困难,确保较高的基因编辑效率。
4. 缩短实验周期:无需构建CRISPR/Cas表达载体、无需等待CRISPR/Cas载体编辑元件的表达,加速实验进度。
服务详情
应用范围 | 1、基因功能探究及验证2、疾病治疗3、基因编辑药物发现 |
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周期/价格 | 在线咨询 |
艾迪基因RNP基因递送服务
艾迪基因凭借多年的基因编辑技术积累,拥有自研的sgRNA/crRNA设计算法、高效的基因编辑Cas酶、CRISPR EDITx™Tran RNP转染试剂、200+电转染实验方案等,形成了成熟的RNP递送实验体系,为客户提供高质量的RNP递送服务。
服务优势
高效sgRNA/crRNA设计与合成
自主研发的高效sgRNA/crRNA设计算法;可根据需求合成不同品质的sgRNA/crRNA(HPLC级、脱盐品级等)
高活性的Cas蛋白
自主优化的Cas蛋白,与拥有成熟的蛋白纯化平台,提供高活性Cas蛋白
多种递送方式
包括电转法、RNP转染试剂等
CRISPR EDITx™Tran RNP高效转染试剂
30min即可完成转染,48h即可检测基因编辑效率
技术路线
应用案例
应用CRISPR EDITx™Tran RNP高效转染试剂介导RNP(AsCas12a+crRNA)在THP-1细胞敲除B2M基因。
· crRNA设计
crRNA: UAAUUUCUACUCUUGUAGAUCAUUCUCUGCUGGAUGACGU
B2M基因编辑位点图示
· 编辑效率检测
转染48 h,收集细胞进行编辑效率检测,ICE Analysis显示编辑效率约为95%。
B2M测序结果
部分细胞RNP介导的基因编辑效率
细胞类型 | 细胞来源 | 敲除效率 |
---|---|---|
THP-1 | 人单核细胞白血病系 | ★★★★ |
Hela | 人宫颈癌细胞系 | ★★★★ |
A549 | 人非小细胞肺癌系 | ★★★ |
C2C12 | 小鼠成肌细胞系 | ★★★ |
MDA-MB-231 | 人乳腺癌细胞系 | ★★★ |
SNU-449 | 人肝癌细胞系 | ★★★ |
H1975 | 人肺腺癌细胞系 | ★★★ |
*敲除效率(%):★★★★>81%,★★★ 51~80%
以上细胞均采用艾迪基因自主研发CRISPR EDITx™Tran高效转染试剂转染RNP。
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
We have create a unique sgRNA Design Logic
Optimazied Strategy
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We have create a unique sgRNA Design Logic
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FAQ
如何选择合适的基因递送方式?
选择适合的基因传递系统需要根据具体实验条件、研究目的以及细胞类型等因素综合评估。定量比较各种系统的传递效率、细胞毒性和稳定性等是进一步明确选择的重要步骤。
病毒递送系统适用于需要高递送效率、基因持续表达的试验,细胞可承受较高的细胞毒性和免疫反应;如果需要较低的细胞毒性和免疫反应,并且操作简便、成本低,则选择脂质体基因传递系统。如果需要高递送效率、递送大片段DNA,且能接受较高的操作难度,基因枪基因递送系统是一个可选的方法。假如需要高递送效率,操作相对简单,且无需特殊设备,电穿孔递送系统可能是一个适合的选择。
病毒递送系统适用于需要高递送效率、基因持续表达的试验,细胞可承受较高的细胞毒性和免疫反应;如果需要较低的细胞毒性和免疫反应,并且操作简便、成本低,则选择脂质体基因传递系统。如果需要高递送效率、递送大片段DNA,且能接受较高的操作难度,基因枪基因递送系统是一个可选的方法。假如需要高递送效率,操作相对简单,且无需特殊设备,电穿孔递送系统可能是一个适合的选择。
在进行基因递送时,培养细胞需要注意哪些问题?
保持细胞培养物的活性,不要让细胞保持汇合超过24小时。解冻新细胞可以恢复转染活性。最佳的细胞铺板密度对于不同的细胞类型或应用而言是不同的,但对于贴壁细胞,转染时汇合度在70%至90%或细胞密度为5×10^5至2×10^6个悬浮细胞/ml通常会产生良好的转染结果。确保细胞在转染时未完全汇合或处于固定相。