产品概述
本试剂盒是piggyBac转座子系统试剂盒,可提供细胞和PB系统质粒。PB系统质粒包含有:一个辅助质粒:编码转座酶;一个转座子质粒:两端含转座子特异性反向重复序列(ITR),中间是被转座基因区域,可转座到宿主基因组中。实验时需同时将辅助质粒和转座子质粒共同转染靶细胞,辅助质粒编码的转座酶识别转座子质粒两端的ITR序列并切割,释放的被转座基因区域由转座酶整合到宿主基因组中含TTAA序列的位点,并在被转座区两端出现TTAA重复序列,当再次转染辅助质粒时转座酶可将基因组中的转座子移除。
piggyBac转座子系统作为非病毒载体,与传统的病毒载体相比,PiggyBac具有以下优势:安全性高、操作方便(可直接用质粒转化细胞);载体容量大,可实现多基因的共表达;可通过调节转座子质粒和辅助质粒的比例,提高外源基因的整合效率,并且可通过反向PCR精确确定目的基因插入的位置;再次转座后实现转座子精确切离;宿主范围广,转座效率高,较少依赖宿主因子。
试剂盒组分
组分 | 规格 | 储存温度 | ||||||
PB 系统质粒 |
辅助质粒(500 ng/μL) |
pCAG-PBase |
4 μg |
-20℃ |
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转座子质粒(500 ng/μL) |
PB-CMV-MCS-EFIα-CopGFP-T2A-Puro |
10 μg |
-20℃ |
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细胞 (可选) |
1×106/管 |
液氮 |
质粒图谱示图
备注:启动子可选择CMV、CAG、EF1α。
操作流程图
PB基因转座细胞株构建流程示意图