基因定点敲入（KI，gene knock in）是指外源DNA片段插入到指定的基因组位置，使该片段行使相应的功能。可以赋予细胞或生物体新的功能或恢复缺陷基因的正常功能，可用于研究基因功能与调控机制、构建疾病模型或开展基因治疗。

目前KI技术局限性
基因敲入（Knock-in, KI）技术在细胞治疗领域具有巨大潜力，但传统方法效率低下，限制了其应用。当前的敲入技术依赖于同源定向修复（HDR），但细胞更倾向于通过非同源末端连接（NHEJ）修复DNA双链断裂，导致敲入效率低。现有的腺相关病毒（AAV）载体虽然效率较高，但存在腺相关病毒载体基因组频繁串联插入、成本高、制造复杂和载荷限制等问题。

HES-KI技术原理
HES-KI是一种新型的敲入技术，通过在必需基因的外显子区域进行CRISPR编辑，并设计一个转基因敲入模板，使得正确的敲入能够恢复必需基因的功能，同时整合目标转基因。如果细胞中未成功进行敲入，NHEJ介导的插入或缺失（indels）将导致必需基因失活，从而使细胞无法存活，从而实现对敲入细胞的正向选择。

HES-KI应用范围
基因治疗：确保细胞治疗中治疗性基因的稳定整合。
干细胞工程：技术在IPSC中实现了高效率的转基因敲入。
功能基因组学：筛选必需基因的功能域或调控元件。
疾病建模：构建高纯度的基因修饰细胞系（如肿瘤突变模型）。