产品属性
产品名称 | 3123123213231231231 |
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物种 | Mouse |
质粒系统 | Three-Plasmid System |
真核筛选标记 | puro |
检测过程
1.将文库电转至Endura 电转感受态(Lucigen, 60242);
2.细胞转移至摇菌管,250 rpm/37℃复苏1 h;
3.涂布至20个 15-cm LB抗性平板,30℃过夜培养;
4.刮取菌落,使用ENZA endo-free plasmid Maxi kit进行质粒大提;
5.按照addgene建库方案进行PCR;
6.混合PCR产物并进行纯化;
7.上样2%琼脂糖凝胶,将260-270 bp条带进行胶纯化回收;
8.使用Qubit dsDNA HS分析试剂盒对提取sgRNA质粒文库进行定量,上机NovaSeq 6000测序,测序策略PE150;
9.使用MAGeCK分析测序数据,确定sgRNA质粒文库质量。
检测结果
测序数据>70% reads可以比对到目标文库,GiniIndex <0.1,覆盖度>99%,制备的sgRNA质粒文库质量良好。