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FLUC-小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（2倍体）(RAW 264.7)

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货号:

EDC010-FLUC

表达基因:

FLUC

规格:

1×10⁶cells

细胞名称:

RAW 264.7

产品介绍

艾迪基因所供Luciferase稳转细胞株采用慢病毒法构建，稳定高效地表达luciferase基因，可实现包括启动子活性研究、哺乳动物细胞双杂交实验以及活体动物成像实验等多方面的灵活应用。

产品属性

货号	EDC010-FLUC
产品名称	FLUC-小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（2倍体）(RAW 264.7)
表达基因	FLUC
细胞形态	贴壁
传代比率	1/5，2days
完全培养基	DMEM + 10% FBS
冻存培养基	70%完全培养基+ 20% FBS+ 10% DMSO；95%完全培养基+5%DMSO（中科院/ATCC）

质粒图谱

细胞复苏方法

注意：收到的细胞如 24h 内复苏，可存放于-80℃冰箱；超过 24h 请存放于液氮中，复苏前 10min 取出，放于-80℃，让管中液氮挥发。
1．水浴锅 37℃预热；
2．适合该细胞系的完全培养基温浴到 37℃；
3．在 15mL 离心管中加入 6mL 完全培养基备用；
4．从-80℃冰箱中取出细胞，在 37℃水浴中轻轻转动冻存管，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯，使细胞在 1min 内迅速解冻（水不能没过盖子或用封口膜把冻存管口封上）；
5．将冻存管转移到超净工作台内；打开盖子前，用 75％酒精擦拭冻存管外部；
6．用移液枪吸取细胞冻存悬液，转移至已预热的完全培养基的离心管内；
7．用 1mL 完全培养基洗涤冻存管 1 次，收集残留细胞，减少损失；
8．细胞悬液以 1100rpm 离心 4min（离心速度和时间取决于细胞种类）
9．离心后，检查上清液是否清澈，有无完整的细胞沉淀；在无菌条件下，小心倒掉上清液，加入 1mL 完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀；
10．将细胞平均接种到 1 个 T25 培养瓶或底面积相当的培养容器中。加入足量完全培养基，1 个 T25 培养瓶中培养基总量不少于 6mL（实际培养瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数量）；
11．摇匀细胞，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中（培养环境取决于细胞和培养基类型）；
12．复苏次日，观察细胞状态。
（1）贴壁细胞若细胞贴壁情况良好，可以更换新鲜的完全培养基；若观察到细胞呈圆亮形态但不贴壁，可以让细胞继续培养 24h 后再进行换液操作。之后，根据细胞的生长状况，每2-3 天更换一次完全培养基，观察细胞，生长至 80％以上的汇合度，即需传代。若细胞生长较慢或汇合度较低时，可以减少换液次数。
（2）悬浮细胞复苏后尽量放在相对小一些的容器中，使用含 20％血清的培养基复苏。悬浮细胞若细胞状态良好，可以更换新鲜的完全培养基；若细胞状态差且呈现灰度，可以继续培养 72h 后再观察细胞。观察发现有活细胞，可进行换液操作，观察细胞无明显变化，及时反馈本公司售后。

细胞传代方法

1．将完全培养基、PBS、胰酶预热至 37℃；
2．从培养容器中吸弃上清；
3．从容器一侧轻轻加入冲洗液 PBS（T25 培养瓶加入约 6mL）洗涤细胞 1 次。注意动作轻柔，清洗全面，避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次吸去 PBS（注：冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）；
4．加入胰酶（T25 培养瓶加入约 3mL），迅速铺匀，保证充分接触细胞表面。放入培养箱消化；
5．显微镜下观察消化情况，约 70％～80％细胞收缩变圆后，轻拍培养容器外壁，使细胞脱离培养表面；
6．立即加入 2 倍胰酶体积的完全培养基（T25 培养瓶加入约 6mL），随即轻摇培养容器，使培养基和胰酶迅速混匀，终止消化；
7．使用移液管吸取细胞悬液，吹打培养容器底面数次，尽可能将细胞都吹打下来；注意：吹打动作不可剧烈，避免产生大量气泡，损伤和损失细胞。
8．将细胞悬液转移至离心管中。用 PBS（T25 培养瓶加入约 3mL）洗涤容器 1 次，收集残留细胞；
9．收集的所有细胞悬液以 1100rpm 离心 4min；
10．离心后去除上清。加入 1mL 完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀；
11．将细胞按一定的比例传代接种，建议首次按照 1：3 进行传代，若细胞在两天内长满可增加传代比例，若细胞生长三四天还未长满，可适当缩小传代比例；
注意：请根据细胞实际生长情况调整传代比例。
12．摇匀细胞，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中（如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖）；
13．传代次日，观察细胞状态。若发现较多死细胞，进行换液操作。之后，每根据细胞的生长情况更换完全培养基，观察细胞，生长至 80％以上的汇合度，即需传代或冻存。